DNA载体的定点突变是常用的分子生物学技术,根据目标突变的碱基序列,设计一对与载体模板互补,同时含有突变位点的引物,利用高保真DNA聚合酶直接扩增环状质粒模板,扩增结束后,形成带有交错缺口的双环突变质粒;扩增产物经特异性识别甲基化和半甲基化DNA的内切酶水解,不含突变的原始模板被内切酶消化,新形成的产物由于没有甲基化而被保留。随后产物转化大肠杆菌,交错缺口在大肠杆菌体内被修复,从而快速获得带有目的突变的完整质粒载体。
本试剂盒针对定点突变技术难点,对产品进行精心优化。试剂盒含有热稳定高保真DNA聚合酶,校对活性高,碱基错配率低,能够保证PCR扩增高质量完成;同时含有甲基化特异性DNA内切酶,能够保证原始模板被彻底水解。同时配合大肠杆菌感受态细胞,能够保证快速高效获得带有目的突变的完整质粒。
DNA载体的定点突变是常用的分子生物学技术,根据目标突变的碱基序列,设计一对与载体模板互补,同时含有突变位点的引物,利用高保真DNA聚合酶直接扩增环状质粒模板,扩增结束后,形成带有交错缺口的双环突变质粒;扩增产物经特异性识别甲基化和半甲基化DNA的内切酶水解,不含突变的原始模板被内切酶消化,新形成的产物由于没有甲基化而被保留。随后产物转化大肠杆菌,交错缺口在大肠杆菌体内被修复,从而快速获得带有目的突变的完整质粒载体。
本试剂盒针对定点突变技术难点,对产品进行精心优化。试剂盒含有热稳定高保真DNA聚合酶,校对活性高,碱基错配率低,能够保证PCR扩增高质量完成;同时含有甲基化特异性DNA内切酶,能够保证原始模板被彻底水解。同时配合大肠杆菌感受态细胞,能够保证快速高效获得带有目的突变的完整质粒。
本产品优点:
操作简便:对模板质粒DNA序列无特殊要求,无需常规的DNA连接酶反应步骤;
一盒两用:PCR扩增,内切酶水解,一个盒子即可完成;
用途多样:可用于DNA克隆的点突变、氨基酸置换、单个或多个氨基酸的删除或插入
突变效率高:一次性获得目的突变的效率可达90%,成功率高;