巴氏染色液（EA36/EA50)使用说明书
产品：巴氏染色液（EA36/EA50)（套装）
货号：GO-R028/GO-R029
规格：4x100mL（套装）
组分：
苏木精染液（A） | 100mL |
返蓝液（B） | 100mL |
橘黄G染液（C） | 100mL |
EA36/EA50染液（D1/D2) | 100mL |
用途：用于各种脱落细胞的形态学观察。
保存：室温,密封,阴凉通风处避光保存。
有效期：未开封染液，有效期为18个月；开封后染液，建议6个月内使用完。每次用完，请注意及时捏紧瓶盖，以免挥发和变质。
检验原理：细胞核是由酸性物质组成的，可与碱性染料苏木精结合，被染成蓝紫色；而细胞浆含有碱性物质，可与酸性染料橘黄G以及EA36/EA50染液（主要成分为亮绿和伊红）结合。由于胞浆成分和染料具有不同的亲和力，导致各组分被染成不同的颜色，使得涂片结构清晰，色彩丰富，对比强烈，尤其能显示鳞状上皮不同的角化程度，常用于阴道涂片测定雌激素水平以及宫颈癌的癌前筛查。EA50染液，含有少许冰醋酸成分，比EA36酸度要高，不易沉淀，染色效果更为稳定，请实验者根据具体标本选用不同染液。
样本要求：新鲜的组织标本，请尽快用95%酒精固定，以避免细胞变性，影响后续染色观察。
自备材料：系列乙醇、盐酸乙醇分化液、二甲苯或其他透明液、中性树胶等
染色方法：（仅供参考）
1. 涂片前处理
(1) 将新鲜涂片置于95%酒精中固定15分钟以上；
(2) 依次浸入80%，50%乙醇中各30秒，水洗1～2分钟，甩干备用；
2. 染色过程
(1) 将处理好的片子浸入苏木精染液（A）中，3～5分钟，水洗1～2分钟，甩干；
(2) 浸入盐酸酒精分化液中分化数秒，水洗1～2分钟，甩干；
(3) 浸入返蓝液（B）中蓝化数秒，水洗1～2分钟，甩干；
(4) 浸入橘黄G染液中（C），染色1～3分钟，95%的乙醇漂洗10～20秒；
(5) 浸入EA36染液（D1）或EA50染液（D２）中，染色２～５分钟，95％的乙醇漂洗10～20秒；
(6) 无水乙醇脱水；
(7) 二甲苯（或环保透明液）中透明２分钟；
(8) 中性树胶封片，镜检观察。
结果观察（仅供参考）：
非角化细胞 | 胞核蓝紫色，胞质淡蓝色或淡绿色 |
角化细胞 | 胞核蓝紫色，胞质淡红色或橘红色 |
红细胞 | 鲜红色或橙红色 |
白细胞 | 胞核蓝紫色，胞质淡蓝或淡绿色 |
上皮细胞 | 胞核蓝紫色，核仁红色，胞质可随分化程度不同，成蓝绿色，粉红色或橘黄色 |
粘液 | 淡蓝或粉红色 |
注意事项：
1. 使用场所应通风。
2. 涂片厚薄要适宜，固定后方可染色。
3. 建议用95％乙醇固定，不建议用高于95％以上乙醇固定，以免染色过深。
4. 苏木精染液（A）表面产生一层氧化膜，底部产生少许结晶沉淀，为硫酸铝钾结晶，属正常现象，使用前除去氧化膜，并使用滤纸过滤。
5. 苏木精染液（A）在染够2000～3000张片子后，应更换新的染液。
6. 苏木精染色随气温和染液的情况而改变，气温较低时，苏木精染色不易着色，可适当延长染色时间；染液以覆盖涂片为宜，染液过少，会因蒸发导致染料沉淀。
7. 分化时间要适度，不宜过长，但如果分化不够，也会导致细胞核颜色过深，胞浆很难上色，可镜检控制，直至细胞核及核内染色质清晰为止（约数秒）；分化完成后，请立即用自来水冲洗，不宜久置，时间过长，会分化掉已经结合的苏木素，而导致染色消失。
8. 返蓝也称碱化，返蓝时间要适度。时间偏短，着色不充分，过长或水洗不充分，则细胞核染为深黑色，影响观察效果，每缸过500片，建议更换返蓝液。
9. 橘黄Ｇ染色时间要适度，时间过长，会导致EA36/EA50不易上色；橘黄G每缸过1000片，建议更换染液。
10. EA36/EA50使用前，要充分搅拌，染色过程中，提拿，旋转染色架数次。每缸过1000～1800张玻片后建议更换染液。
11. 技术人员操作时，动作应流畅，一气呵成，切忌把上一缸染色液带入下一缸，每缸交替时，要甩干玻片上残存液体；不熟练者，建议用小缸操作，小批量操作，以免浪费标本和染液。
12. 操作人员，要做好个人防护，建议戴手套，穿防护服进行操作。
常见问题：
１.胞浆着色不佳，一般常见的因素
(1) 如果全片内胞浆都淡染，建议延长染色时间，或者更换染液；
(2) 如果胞浆不分色，或均为浅红色，适当增加染色时间，能够部分纠正不分色状况；
(3) 胞浆不分色的另一原因是，EA溶液的pH值不恰当所致，如染色为红色，可加少许磷钨酸溶液纠正；如染色均为蓝色或绿色，可加少许饱和碳酸锂溶液纠正；对于改良EA染液，每100mL染液中，加入2mL冰醋酸，染色效果更佳，使用更持久。
(4) 胞浆染成灰色或紫色，是由于苏木素染色时间过长，或者盐酸酒精分化不佳，经过褪色后，重新苏木素染色，可以纠正；
(5) 由于不同的标本，同样配方的EA溶液可造成偏蓝，偏绿和偏红，对不同的标本，建议使用不同的EA溶液。现在常见的染液一般有EA36，EA50、EA65以及改良EA染液，一般经验认为，EA36和EA50适用于妇科标本，EA65和改良EA染液适用于非妇科标本。建议研究者使用的时候，可结合常规经验，进行小量实验，以确定最佳染液。
２. 胞核着色不佳，一般常见的因素
(1) 胞核着色过浅，一般由于盐酸分化时间过长，或者苏木素染色较短，需要延长苏木素染色时间，或者缩短分化时间，或者延长返蓝（碱化）时间；苏木精染色缸中，定期加入少量新鲜的苏木精染液，或者彻底更换新鲜的染液；
(2) 胞核着色过深，一般由于盐酸浓度不够，可适当加入几滴盐酸以增加浓度；或者碱化（返蓝）时间过长，可缩短时间或者用水充分漂洗。
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