1． 采用断头术处死小鼠，在75％的酒精中浸泡2－3min后，置于无菌平皿中，剪开皮肤。取出双侧股骨，用无菌的生理盐水（或RPMI－1640代替）刷洗2－3次后剪开骨两端，用1ml的注射器抽取RPMI－1640液，将骨髓细胞冲入15ml离心管中。

2． 将骨髓细胞轻轻吹打，使细胞完全悬浮，静置五分钟，然后转入另一个15ml离心管中，离心，1200rpm，10min 。

3． 弃上清，细胞沉淀按1：10加入Tris-NH4CL缓冲液，轻轻吹打混匀，室温放置五分钟。

4． 离心后，弃上清，细胞沉淀用RPMI－1640洗涤两遍。

5． 细胞计数，用RPMI－1640调整细胞浓度为0.5-1×10⁵ ／ml，置于六孔培养板中，每孔2ml。

6． 37℃，5％CO₂，饱和湿度下贴壁2－3h

7． 吸弃上清，用37℃预温的RPMI－1640轻轻洗去非贴壁的细胞，每孔加入2ml的完全培养液继续培养。

8． 隔日半定量换液，小心弃去悬浮细胞，轻轻转动培养板，防止细胞凝集。第七天收集悬浮细胞，做相关的实验。