抗体稀释/封闭液使用说明书

产品：抗体稀释/封闭液

货号：GO-R045

规格：100mL

保存：4℃保存，一年有效

产品简介：本品是一定量高品质脱脂奶粉和BSA以及少量抗体稳定剂和防腐剂，溶于适量TBST缓冲液中配制而成。

用途：对免疫蛋白印迹（WB）一抗或二抗进行稀释；对转印蛋白膜进行封闭；对免疫组织化学（IHC）抗体进行稀释；其他实验场景下，稀释抗体。

原理：电泳后，蛋白质被转移到纤维素膜上，此时如果直接进行一抗和二抗孵育，由于抗体和膜非特异性结合，导致背景信号太强，甚至会掩盖目的分子。转膜后，通常要对膜进行封闭，然后再进行抗体孵育等下游操作。本产品利用BSA和脱脂奶粉的高吸附

性，可以有效封闭膜的非特异信号，同时，加入了少量抗体稳定剂，亦可以用于一抗和二抗稀释。

使用方法（以WB为例，仅供参考）：

1）转膜：蛋白被转移到纤维素膜上；

2）膜封闭和漂洗：膜放入器皿中，倒入2～3倍体积的本稀释液，置于脱色摇床上，不停摇动，4℃，1小时；封闭后，用1×TBST缓冲液，漂洗5分钟；

3）一抗工作液配制：一抗用本稀释液按照特定浓度稀释即为一抗工作液（最佳浓度确定方法见注意事项2）；

4）一抗孵育和漂洗：膜放入孵育盒中，倒入2～3倍体积的一抗工作液，置于脱色摇床上，轻轻摇动，4℃，过夜（很少超过18小时）；孵育好的膜用1×TBST漂洗2～3次；

5）二抗工作液配制：二抗用本稀释液按照特定浓度稀释，即为二抗工作液（稀释浓度确立办法见注意事项2）；

6）二抗孵育和漂洗：膜放入孵育盒中，倒入2～3倍体积的二抗工作液，置于脱色摇床上，轻轻摇动，室温，1～2小时；孵育好的膜用1×TBST漂洗2～3次；

7）发光：膜沥干，加入发光液，进行曝光等后续操作。

注意事项：

1) 抗体稀释，也有实验室采用1xTBST直接稀释，建议按照实验室操作习惯或参考抗体厂家说明书进行；

2) 抗体稀释浓度，建议在参考抗体厂家说明书基础上，同时做浓度梯度，根据结果摸索最佳稀释浓度，一般一抗稀释浓度为1：500～1：3000，二抗稀释浓度为1：100～1：20, 000，随着现代生产工艺改进，特别是三代抗体生产技术应用，抗体纯度越来越

高，建议抗体稀释，浓度不要太高；

3) 膜封闭和抗体孵育的时候，建议置于摇床上，轻轻摇动，有助于膜和抗体充分结合。

4) 本产品仅供科研使用，不能作为非科研用品使用。

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厂家信息：

公司：北京瀚海拓新生物技术有限公司

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