世界上的任何事情，都是相对的。

比如我和姚明相比，我是个矮子；我和侏儒相比，我还是大个。

智商也是，我和爱因斯坦相比，我是个傻子；我和另外一些人相比，我可能还很聪明。

WB实验，也不例外。

为了确定目的蛋白的表达趋势，我们首先就定一个标准，一个参照。

这个参照，我们一般称为“内参蛋白”，顾名思义，就是“内部参考蛋白”，没有这样的一个标准，我们是无法搞清楚目的蛋白的表达的。

内参蛋白，是由细胞内保守基因表达的，一般表达稳定，不容易受样本处理或者其他因素的影响。

如何选择内参蛋白？

一般要考虑三个因素：

1）样本来源：哺乳动物来源的样本，一般可以选择GAPDH、β-actin、β-Tubulin、Histone H3等等，植物来源的样本，可以选择Plant actin；

2）表达稳定性：绝大部分内参蛋白，表达不受外界因素影响，但某些情况下，某些内参蛋白也会发生改变，如缺氧可能导致GAPDH表达上调。所以在研究有关氧对组织的影响时，尽量避免使用GAPDH；

3）和目的蛋白的分子量的差距：内参和目的蛋白的分子量，差距不要太近，太近不容易区分出相应的条带；但差距也不要太远，太远，难以通过内参蛋白去预测和调控某些实验参数，如电泳时间，电压，转膜时间等等。一般建议在5-10Kda为宜。具体内参分子量见我上图。

4）目的蛋白的表达位置：有的蛋白在细胞核内表达，有的在细胞浆内表达，胞浆内表达的蛋白就不能选用唯一在细胞核内表达的内参。