苏木精-伊红染色液使用说明书

产品：苏木精-伊红染色液（套装）

货号：GO-R001

规格：4x100mL（套装）

 组分：

保存：室温密封避光保存，有效期12～18个月

用途：用于各种细胞、石蜡切片、冰冻切片、涂片及印片等染色，是组织和细胞形态学观察的基本方法。

检验原理：细胞核是由酸性物质组成的，可与碱性染料苏木精结合，被染成蓝紫色；而细胞浆含有碱性物质，可与酸性染料伊红结合，被染成不同程度的红色，通过胞浆各种组分的颜色差别，可以观察组织和细胞的一般形态结构。

样本要求：涂片、切片和印片要充分固定，石蜡切片要充分脱蜡。

自备材料：系列乙醇、二甲苯或其他透明液、中性树胶等

染色方法（仅供参考）：

1. 切片染色前处理

(1) 石蜡切片前处理：将石蜡切片浸入脱蜡液（或二甲苯）中脱蜡5～15分钟，将脱蜡干净的切片分别经95%乙醇，80%乙醇，70%乙醇中各处理1分钟，自来水冲洗1分钟，甩干。

(2) 冰冻切片前处理：冰冻固定液固定5分钟或者用50%、70%及95%乙醇固定脱水脱脂，水洗备用。

(3) 涂片、切片或印片前处理：染色前要进行固化操作，防止染色过程掉片。

2. 染色过程

(1) 将处理好的片子浸入或滴加苏木精染液（A液），染色5～10分钟，自来水冲洗1～2分钟，甩干。

(2) 浸入或滴加分化液（C液），分化数秒，水洗。

(3) 浸入或滴加滴加返蓝液（D液），返蓝数秒，水洗1～2分钟，甩干。

(4) 浸入或滴加伊红染液（B液），染色30～60秒，倾去多余染液后，依次浸入或滴加80%乙醇，95%乙醇数秒（时间不宜过长），快速调色脱水，显色后，浸入或滴加无水乙醇，脱水2分钟。

(5) 二甲苯（或其他透明液）透明2分钟，中性树胶封片，镜检观察。

结果观察（仅供参考）：细胞核蓝紫色，细胞质，间质以及各种纤维呈现不同程度红色

注意事项：

1. 使用场所应通风，实验者操作时，要做好个人防护，建议带手套，穿防护衣进行操作。

2. 苏木精染液（A）表面产生一层氧化膜，底部产生少许沉淀，为硫酸铝钾结晶，属于正常现象，使用前除去氧化膜，并定期过滤。

3. 苏木精染液（A）在染够2000～3000张片子后（缸染），应更换新的染液。

4. 苏木精染色随气温和染液的情况而改变，气温较低时，苏木精染色不易着色，可适当延长染色时间；染液以覆盖涂片为宜，染液过少，会因蒸发导致染料沉淀。

5. 分化时间要适度，不宜过长，但如果分化不够，也会导致细胞核颜色过深，胞浆很难上色，可镜检控制，直至细胞核及核内染色质清晰为止（约数秒）；分化完成后，请立即用自来水冲洗，不宜久置，时间过长，会分化掉已经结合苏木素，而导致染色消失。

6. 返蓝也称碱化，返蓝时间要适度。时间偏短，着色不充分，过长或水洗不充分，则细胞核染为深黑色，影响观察效果，每缸过500片，建议更换返蓝液。

7. 伊红若着色困难，可在每100mL伊红染液中，加入1～2滴冰醋酸，促使着色；

8. 伊红在水和系列浓度乙醇中，会使胞浆着色的伊红脱色，所以脱水操作中，时间不宜过长，建议快速脱水；

9. 涂片，切片和印片染色，经固定水洗后，染色方法和石蜡切片相同。

10. 技术人员操作时，动作应流畅，一气呵成，切忌把上一缸染色液带入下一缸，每缸交替时，要甩干玻片上残存液体；不熟练者，建议用小缸操作或者滴染，小批量操作，以免浪费标本和染液。

常见问题：

１.胞浆着色不佳，一般常见的因素

(1) 如果全片内胞浆都淡染，建议延长染色时间，或者更换染液；

(2) 如果胞浆不分色，或均为浅红色，适当增加染色时间，能够部分纠正不分色状况；

(3) 胞浆染成灰色或紫色，是由于苏木素染色时间过长，或者盐酸酒精分化液分化不佳，经过褪色后，重新苏木素染色，可以纠正；

２. 胞核着色不佳，一般常见的因素

(1) 胞核着色过浅，一般由于分化时间过长，或者苏木素染色较短，需要延长苏木素染色时间，或者缩短分化时间，或者延长返蓝（碱化）时间；苏木精染色缸中，定期加入少量新鲜的苏木精染液，或者彻底更换新鲜的染液；

(2) 胞核着色过深，一般由于盐酸浓度不够，可适当加入几滴盐酸以增加浓度；

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