革兰氏染色液使用说明书

产品：革兰氏染色液（套装）

货号：GO-R031

规格：4x100mL（套装）

组分：

用途：主要用于区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的涂片染色。

保存：室温,密封,阴凉通风处避光保存。

有效期：未开封染液，有效期为18～24个月；开封后染液，建议6个月内使用完。每次用完，请注意及时捏紧瓶盖，以免挥发和变质。

检验原理：

革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别方法，主要用于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的区分。革兰氏阳性菌，其细胞壁较厚，肽聚网层次较多，且交联致密，通过龙胆紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的龙胆紫与碘的复合物。经脱色液脱色时，肽聚糖脱水，使孔径变小，龙胆紫与碘复合物仍然被保留在细胞壁上，呈紫色；相反，革兰氏阴性菌，其细胞壁较薄，外膜层类脂含量高，肽聚糖层薄，且交联度差，脱色后，其类脂外膜迅速溶解，缝隙变大，龙胆紫与碘复合物溶出，此时再用沙黄溶液复染，呈红色，从而快速用于细菌分类鉴定。

样本要求：

菌液涂片，必须薄而均匀。一般自然干燥即可，若采取加热固定，通过火焰1-2次即可，不可过热，以玻片背面接触手背不烫为准，否则有可能改变细菌形态，从而影响观察结果。

操作方法（仅供参考）：

（一）涂片固定：

菌液涂片，自然干燥，固定；或加热固定，注意温度不可过高

（二）染色：

1. 初染：滴加龙胆紫溶液（A），染色10秒，水洗，甩干；

2. 媒染：滴加碘溶液（B），染色10秒，水洗，甩干；

3. 脱色：滴加脱色液（C），脱色10～20秒后，水洗，甩干；

4. 复染：滴加沙黄溶液（D），复染10秒，水洗；

5. 观察：滤纸吸干多余水分或在空气中自然干燥后，油镜观察。

结果观察：　　　　　　　　　　　　　　　　　

注意事项：

1. 使用场所应通风，操作人员要做好个人防护，建议带手套，穿防护衣操作，操作人员操作时，工作应流畅，不熟练者，建议先小批量与实验室，以确定最佳浓度和最佳染色时间；

2. 尽量采用新鲜标本，采用陈旧标本涂片时，有产生假阳性或假阴性的可能；

3. 染色时间，视标本种类、涂片厚薄等稍作调整，染妇科白带涂片时，稍延长染色时间，以不少于10秒为宜，可获得更佳染色效果；

4. 试剂用完后，请注意拧紧盖子，以免挥发；

5. 脱色液，也可用95%的乙醇代替，但脱色时间可适当延长；

6. 试剂储存时，要尽量避免高低温环境及阳光直射；

7. 冬季室温过低时，要适当延长染色时间；

8. 涂片过厚，脱色时间不足，龙胆紫染色时间过长，有可能导致假阳性的结果；细菌涂片热固定过度，细胞培养时间太长，脱色过度等有可能导致假阴性的结果。

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